Metodologías+Diagnósticas+de+PIF

  **__ **__Metodologías de Diagnóstico de PIF __**: __** **__ ELISA específico de PIF __** __**Anticuerpos Fluorescentes**__
 * Muestras clínicas: líquidos torácico y abdominal, pulmones, riñón, hígado, bazo y encéfalo.
 * Forma húmeda: hay cantidades variables de un líquido característico, rojo, filamentoso con fibrina, en las cavidades abdominal y/ o torácica, y adherencias fibrinosas en los órganos viscerales, particularmente bazo e hígado.
 * Lesiones multifocales tipo granulomatosas blanco grisáceas en la superficie de varios órganos. Las lesiones afectan más comúnmente a los ojos, encéfalo, hígado y riñones.
 * Mediante examen histológico se puede observar fibronecrosis y piogranulomas.
 * Las células infectadas están generalmente restringidas a las superficies o cerca de las superficies de los tejidos afectados, y dentro o alrededor de las lesiones.
 * ** Se obtiene un diagnóstico definitivo mediante la técnica de anticuerpos fluorescentes, al observar células colectadas de las efusiones. **
 * Los resultados de las pruebas serológicas (ELISA, inmunofluorescencia indirecta), son considerados de poco valor diagnóstico, aunque para algunas personas títulos de anticuerpos altos son sugerentes de PIF.
 * __ PRUEBAS PARA DETECTAR LA PERITONITIS INFECCIOSA FELINA (PIF) __**
 * Una prueba por PIF positiva unida a la presencia de signos clínicos es bastante indicativa de PIF, pero un resultado negativo no permite descartar esta enfermedad viral.
 * Una prueba positiva en un animal que no presente signos clínicos indica que el gato puede ser portador y no se le debería introducir en una colonia nueva de gatos, pero no es un signo definitivo de que el gato no pueda desarrollar una peritonitis infecciosa felina.
 * ** Existen pruebas para detectar los anticuerpos frente al coronavirus felino (CVFe-ELISA, CVFe-AIF), ** pero estas son pruebas séricas inespecíficas , ya que demuestran la exposición a cualquier coronavirus felino. Darán positivo los gatos que han estado expuestos al coronavirus entérico, a la vacuna antivírica o al virus de la PIF.
 * ** CVFe-PCR: ** Esta prueba puede realizarse en heces o en sangre. Parece que los virus de la PIF son mutaciones de los coronavirus felinos que aparecen en los gatos inmunodeprimidos.
 * Detecta Acs dirigidos frente a una proteína (7B) secretada por el coronavirus responsable de la PIF.
 * Los gatos con Acs frente a esta proteína han estado expuestos al virus de la PIF.
 * Falsos negativos se dan cuando gran parte de los anticuerpos frente a la proteína 7B se encuentran ligados al antígeno y, por tanto, la cantidad de anticuerpo libre no es suficiente para ser detectada.
 * Los falsos positivos no se dan.
 * Los gatos con unos títulos >160 tienen mayor probabilidad de desarrollar la enfermedad, pero es posible que la enfermedad no se manifieste en todos los animales
 * **__ PCR específica para la PIF __** **
 * Se pueden detectar los coronavirus modificados que estén presentes en el exudado y las heces.
 * Virus ARN, material genético debe transformarse a ADN mediante una transcriptasa inversa antes de ser sometido a la PCR
 * No es una prueba adecuada para medir niveles de antígeno viral en sangre debido a sus bajas concentraciones.
 * Cuando el virus está completamente ligado a anticuerpos es posible que no pueda ser detectado en el exudado.
 * El propio exudado es la consecuencia de la lesión vascular ocasionada por los complejos Ag-Ac pero no por el virus.
 * Cuando se obtiene un resultado positivo se confirma el diagnóstico, pero cuando se da un resultado negativo y si el gato presenta signos clínicos no puede descartarse que el virus sea la causa de enfermedad.
 * Empleo: Para detectar antígeno viral en materiales clínicos o en cultivos celulares infectados.
 * La prueba de anticuerpos fluorescentes (AF) detecta antígenos virales en células infectadas con anticuerpos antivirales específicos que han sido marcados con un colorante fluorescente (isotiocianato de fluoresceína).
 * Las pruebas de AF se efectúan en secciones de tejidos congelados, frotis de sangre, impresiones tisulares, raspados o en cultivos celulares.
 * Hay dos tipos básicos de técnicas de AF: directa (DFA) e indirecta (IFA). En la prueba directa se marca el anticuerpo antiviral. Este anticuerpo marcado se emplea para detectar los antígenos virales en secciones congeladas de tejidos, raspados, frotis sanguíneos, etc.
 * Procedimiento de IFA:
 * La muestra a ser examinada se hace reaccionar con un anticuerpo antiviral no marcado.
 * Después de proporcionar un período de incubación suficiente para que haya una interacción antígeno-anticuerpo (generalmente una hora o menos), se lava la muestra y se incuba con un anticuerpo marcado dirigido contra IgG de la muestra en la cual se preparó el anticuerpo antiviral no marcado.
 * Este anti-anticuerpo marcado se anclará al anticuerpo no marcado anclado al virus, y si esto ocurre, se observa la fluorescencia y la prueba se considera positiva.
 * La técnica IFA generalmente es más sensible y específica.
 * La prueba de inmunofluorescencia o anticuerpo fluorescente (FA) es la prueba más útil empleada rutinariamente en el diagnóstico viral.